YY/T 0993-2015.Biological evaluation of medical devices- Nanomaterial :In vitro cytotoxicity tests (MTT assay and LDH assay).
4.1 总则
试验样品可选用纳米材料(用于制备含纳米材料医疗器械的原材料)稀释液及纳米材料医疗器械的浸提液。在试验前宜先对材料进行充分的物理化学表征,以便合理地解释生物学反应。例如颗粒的大小和表面化学特性会引起不同的试验结果。每次试验应包括阳性对照和阴性对照。试验中使用的试剂、耗材及设备详见附录A.
注:随着国际纳米毒理学研究的进展和认知水平的提高,鼓励根据供试品的预期用途和自身特性选择更合适阳性对照和阴性对照。
4.2样品稀释液或浸提液的制备
4.2.1样 品稀释液
纳米材料稀释液:将纳米材料直接稀释于细胞培养液中,制备不同浓度的稀释液。
4.2.2样 品浸提液
4.2.2.1浸提原 则
应遵循GB/T16886.12的要求制备浸提液:
a)按照GB/T16886.12要求的表面积比取材(应包含纳米材料在内的部分),将纳米材料医疗器械放人浸提介质中进行浸提;
b)也可根据材料特点选择质量比取材。
4.2.2.2浸提介质
浸提介质的选择可参照GB/T 16886.5的要求。
注1:不同的浸提介质可能会影响纳米颗粒的表面特性，如:颗粒的大小.颗粒的聚集特性.表面电荷的变化、白质及其他物质的吸附、离子的释放等.进而影响纳米材料的细胞毒性反应。因此.没提介质的选择非常重要.宜闸述选择的理由.
注2:根据目前的认知水平,推荐使用不含血清的细胞培养液做为纳米材料的浸提介质。随着国际纳米毒理研究的进展和认知水平的提高.鼓励根据试验样品的预期用途和纳米材料自身特性选择更合适的浸提介质。
4.2.2.3浸提条 件
可参照GB/T 16886.5的要求。根据目前的认知水平,推荐的浸提条件为:(37土2)C下不少于24 h。在非必需情况下,浸提液无需过滤,把从纳米材料医疗器械中浸提出的含纳米颗粒和离子的浸提液
YY/T 0993-2015 医疗器械生物学评价纳米材料:体外细胞毒性试验(MTT试验和LDH试验)