YY/T 1562-2017.Tissue engineering medical device products- Biomaterial scaffolds-Guide for cell viability evaluation.
4概述
YY/T 1562概述了定量检测有孔或无孔、坚硬的或柔软的生物材料支架内部或表面活性细胞和无活性细胞的数量及分布的常用方法。这些方法既可以用于测定生长在完整三维生物材料支架或基质内的细胞(非破坏性方法).也可以用于已经从支架或者基质中提取的细胞(破坏性方法)。除了提供现有技术的概述,本标准也描述了生物材料支架与细胞活性试验特定的相互作用,这些相互作用能够干扰细胞活性分析的精度。另外,本标准还描述了如何避免和/或者判断生物材料支架与细胞活性试验相互作用产生的干扰。
YY/T 1562中大多数方法来源于二维培养的细胞数量分析,但是经过调整e能够用于分析三维构建物内细胞的情况。本标准探讨了这些方法的机理和灵敏度。部分试验采用二维培养的细胞建立标准曲线,由此产生的局限性在本标准中也有所说明。此外,本标准中还就生物材料支架本身对活性检测试验影响进行了阐述。
当多种测试方法组合使用时,可更为精确地测量活性细胞、无活性细胞的数量和分布。目前,有多种静态或动态方法将细胞接种在生物材料支架上。每种方法有不同的细胞接种效率。总体来说,静态方法相比动态方法的接种效率要低。本标准阐述的方法能够协助建立起细胞接种方法与接种效率的关系,并且能够对特定接种方法下的活性细胞数量进行标准化检测。在培养或移植过程中,较厚的生物材料支架或者富含细胞的生物材料支架会导致传质障碍(物质扩散受限).造成构建物中央的细胞死亡，只有外缘有活性细胞。这种活性细胞的空间分布差异可采用本标准中的检测方法进行定量。另外,培养方法或者生物反应器条件对于材料内部细胞活性的影响同样能够通过本标准中的方法进行评估。
5评价方法的选择
5.1表1概述了用来定量生物材料支架表面或内部细胞活性的方法(但不限于这些方法)。需要注意的是,这些方法常需要联合应用以确定活性细胞和无活性细胞的总数量,另外,可进--步检测具有增殖活性的细胞数量。增殖的细胞具有活性,但活性细胞不一定都增殖。即使无活性细胞结构不完整或不能进行完整的新陈代谢行为,仍可以采用使染料通过破损的细胞质膜进人细胞的方法将无活性细胞鉴定出来。
YY/T 1562-2017 组织工程医疗器械产品生物材料支架细胞活性试验指南