YY/T 1577-2017.Tissue engineering medical device products-Standard guide for microstructure of polymeric scafforlds.
6.1.5绝大多数聚合物支架能经标准操作程序用环氧树脂固定.然后切片进行透射电子显微镜检查。但这-方法不太适合研究可能脱水的水凝胶材料。不过在树脂包埋前通过使用系列浓度酒精进行梯度脱水能在一定程度上解决这一问题。但是这一操作可能降低样品中充满水的孔隙的尺寸。这样获取的孔径定量数据在比较不同样品间的微结构时具有价值。然而由于样品变形,这些结果在表征支架预期的体内微结构时作用降低。
6.2光学 显微镜方法
6.2.1假若 样品的结构和周围介质之间有足够高的对比度,使得最低处理条件下或天然状态(即样品不需染色或切片)的样品表面特征也能被研究,那么可应用光学显微镜方法。该方法的不足在于光线对样品的穿透有限,特别是由于散射。光线对多孔基质的穿透更为有限。实际上,这限制了共聚焦显微镜和光学相干断层技术的应用深度--般低于0.5mm。
6.2.2通过 光学显微镜能获取支架表面图像。改变焦距可以获得半透明样品不同景深的图像。这些深度图像可用于样品内连通孔隙的路径追踪。
6.2.3共聚焦显微镜利用支架材料的天然荧光特性或诸如荧光素蛋白等荧光染料,能实质性地提高样品的光学成像质量。由于其较窄的景深和消除焦点外光线,共聚焦显微镜能拍摄不同深度的清晰图像。通常优先用激光做点光源而不用通常的照明光源，现代绝大多数的仪器使用多个激光光源。这能提高图像对比度.激发与不同的结构成分结合的染料.发射不同波长的荧光。澈光扫描共聚焦显微镜能利用反射或透射模式。针孔的尺寸和目镜的数值孔径在很大程度上决定了其厚度或轴向的分辨率。通常小针孔具有更好的分辨率,但牺牲了强度。激光扫描共聚焦显微镜已用于进行--些支架表征的研究工作。6.2.4光学相干断层扫描是一种光学反射成像技术,通过对不同深度层而散射光的干涉抑制来确定轴向分辨率,而不是激光扫描共聚焦显微镜使用的针孔。简单地说,光学相干断层扫描技术使用带宽在30nm~200nm间的低相干光和干涉仪(通常是Michelson型),可产生任一横截面的背向反射剖面图。对光学相干断层扫描技术及其应用的完整描述可见。类似的技术是A型超声扫描。在迈克逊图像中，材料是干涉仪的信号臂而不是参照反光镜,低数值孔径的透镜用来获取更大的轴向取样体积,将样品的反射光按照位置的深度进行绘图。如同激光扫描共聚焦显微镜,横向分辨率由光東的几何尺寸决定,不同的是轴向分辨率与光源的带宽呈反比.典型的轴向分辨率为10 mm。光学相干断层扫描技术的优势在于其高灵敏性,达90 dB,已广泛用于人体视网膜、皮肤和血管,以及活体小动物的循环系统的功能显像。在20世纪90年代末期,首次预见了光学相干断层扫描技术用于材料科学领域的潜能。第--次发表的组织工程支架的光学相干断层扫描图像是关于水凝胶材料的，该研究证实了图像获取的深度。图像的探测深度受来自于材料孔隙和微晶的散射的限制。探测深度能从约100 μm到若干毫米,取决于材料与其周围反射指数的差异、孔隙率和孔径分布。用反射指数与支架材料相近的液体填充孔隙能提高穿透深度。实际上,通常用水替代空气.或油替代水。
YY/T 1577-2017 组织工程医疗器械产品聚合物支架微结构评价指南