YY/T 1479-2016.Sterility test method for membrane filters.
5.6洗脱法
对于体积较大和/或结构复杂而无法使用直接接种法的薄膜过滤器或其组件,可使用洗脱法。每个滤器及其组件用50 mL~100 mL洗脱液分别冲洗容器内壁.滤膜管路,至少一次.洗脱液收集于无菌容器中,通过膜过滤法处理。
如果薄膜过滤器中可能存在对微生物的促生长产生不良影响的条件,如其特殊的物理性质或释放化学物质,推荐使用洗脱法。将洗脱液过滤,富集洗脱液中的微生物,并对消除或降低(如果无法消除)其所产生的影响是一个有效的方法,但该方法应进行验证。
如果要采用洗脱法,需考虑的因素应包括:
a)适当洗脱液的选择;
b)洗脱技术获得薄膜过滤器及其组件中含有微生物的能力;
c)滤膜的过滤/阻隔作 用对滤膜上下游污染微生物洗脱效果的影响;
d)洗脱技术对微生 物活性的影响;
e)通过膜过滤方法将洗脱液中的微生物从洗脱液中富集,应额外选择-套有效的过滤系统;
f) 过滤系统参考《中华人民共和国药典)要求,借助于真空或压力使洗脱液通过孔径不大于
0.45 μm的封闭式无菌薄膜过滤器,使洗脱液通过薄膜过滤器。此后， 封闭过滤器液体出口并
将培养基在无菌条件下移入过滤装置。
5.7阳性对照
薄膜过滤器无菌试验均应做阳性对照。平行制备--份装有硫乙醇酸盐流体培养基的培养容器,然后接种小于100 CFU(菌落形成单位)的金黄色葡萄球菌至该容器中,菌液制备参见附录A中A.2.2.2.如采用洗脱法,可使用三联薄膜过滤器处理洗脱液,并在其中一张滤膜的培养容器内添加阳性对照菌,但取样量需相应增加至原来的1.5倍.
如联合使用两种方法,每种方法处理每个部件的培养容器均需独立做阳性对照.
阳性对照30 C~35 C培养48 h~72 h应生长良好。
注:如薄膜过滤器含有可抑制特定微生物生长的成分,阳性对照菌和对应培养基需依据<中华人民共和国药典的相关要求进行选择.
5.8阴性对照
膜过滤器无菌试验均应做阴性对照,如采用直接接种法,每种培养基额外各制备一份不含薄膜过滤器或其组件的培养容器,并在试验后同法培养;如采用洗脱法,则用薄膜过滤法处理所使用的洗脱液并培养;如联合使用两种方法,每种处理方法均需按上述方法做阴性对照。阴性对照培养14 d应无菌生长.
YY/T 1479-2016 薄膜过滤器的无菌试验方法