SN/T 3449-2012.Detection and identification of candidatus phytoplasma in insect vector.
1范围
SN/T 3449规定了昆虫介体中植原体的检疫和鉴定方法。
SN/T 3449适用于进出境及国内监测中同翅目和半翅目(具刺吸式口器)昆虫体内植原体的检疫和鉴定。
2原理
根据传播植原体的昆虫介体种类(参见附录A)及植原体的分子生物学特性进行鉴定。
3仪器和试剂
3.1仪器设备
PCR仪、超净工作台、高压灭菌锅、制冰机、核酸蛋白分析仪、高速冷冻离心机、台式小型离心机、超低温冰箱、常规冰箱、旋涡振荡器、移液器、电泳仪.凝胶成像系统。
3.2主要试剂
甘油、75%乙醇、无水乙醇、冰醋酸、三氯甲烷、卡诺固定液(无水乙醇:冰醋酸:三氯甲烷=6: 1 : 3)、昆虫保存液(75%乙醇,1%甘油)、PCR缓冲液、MgCl2、dNTPs.Taq DNA聚合酶、引物、TAE电泳缓冲液、DNA相对分子质量标准.SYBR Green I等。
4检测鉴定方法
4.1昆虫的前处理
昆虫饥饿处理12h,以防止昆虫肠道内食物DNA的污染。
4.2昆虫体内植原体基因组DNA提取
昆虫体内植原体基因组DNA的提取方法(见附录B)。
4.3巢式PCR扩增及凝胶电泳检测.
用两对植原体扩增通用引物进行巢式PCR扩增并进行凝胶电泳检测(见附录C)。
SN/T 3449-2012 昆虫介体中植原体检疫鉴定方法
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