SN/T 3448-2012.Detection and identification of peach yellows phytoplasma.
1范围
SN/T 3448规定了桃树黄化植原体的检疫和鉴定方法。
SN/T 3448适用于进出境桃树苗木及接穗中桃树黄化植原体的检疫和鉴定。
2原理
2.1 基本信息
桃树黄化植原体( peach yellows phytoplasma)，软壁菌门(Tendericutes) ,柔膜菌纲( Mollicuteria),
菌原体目(Mycoplasmatales) ,非醇原体科(Acholeplasmataceae) ,植原体候选属(candidatus phytoplas-ma),16 Sr I植原体组。
2.2 方法原理
植原体的生物学特性和基因序列等分子生物学信息是该检疫鉴定方法的依据。
DAPI作为一种初步筛选植原体的方法; PCR技术灵敏度高、特异性好,RFLP技术目前是国际上植原体鉴定分类的主要方法,在本标准中PCR技术与RFLP技术结合作为鉴定桃树黄化植原体的最终方法。
3器材和试剂
PCR仪、超净工作台、灭菌锅、制冰机、核酸蛋白分析仪、高速冷冻离心机,台式小型离心机、超低温
冰箱、冰箱、旋涡振荡器、微量进样器、电泳仪、凝胶成像系统、荧光显微镜、电子显微镜。
4检测鉴定方法
4.1症状观察
仔细观察桃树种苗、叶片等,症状描述参见附录A的A.1。
4.2 DAPI 染色
选取幼嫩组织(新叶叶梗,枝梢,茎杆及根部韧皮部组织)，切片,用1μg/mL DAPI溶液(4',6-二脒基-2苯基吲哚)染色,在460nm激发条件,荧光显微镜观察,在韧皮部筛管部位有明显的蓝色荧光信号表明有植原体存在。因植株内植原体分布不均,故每个样品需选取不同部位的幼嫩材料进行检测。
SN/T 3448-2012 桃树黄化植原体检疫鉴定方法
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