SN/T 3579-2013.Viability detection of Ph ytophthora sojae Kaufmann & Gerdemann.
1范围
SN/T 3579规定了应用激光扫描共聚焦显微镜对大豆疫霉病菌( Phytophthora sojae Kaufmann&.Gerdemann)的活性进行检测的方法。
SN/T 3579适用于大豆及土壤中携带的大豆疫霉病菌的活性检测。
2原理
应用荧光染料对大豆疫霉病菌的卵孢子进行染色处理,根据大豆疫霉病菌不具活性的卵孢子染色后卵质体断裂、边集,呈致密浓染绿色和具有活性的卵孢子染色后卵质体呈均匀绿色的染色效果差异，运用激光扫描共聚焦显微镜对病菌孢子进行检测，分析其活性情况。
3仪器用具和试剂
3.1 仪器用具
激光扫描共聚焦显微镜.显微镜、高压灭菌锅、生物安全柜、生化培养箱、冰箱。
3.2 试剂
吖定橙、磷酸缓冲液(PBS,0.1 mol/pL,pH7. 0)、水琼脂培养基。
4活性检验方法
4.1 病原菌孢子获取
在显微镜下,将发现并鉴定为大豆疫霉病菌卵孢子挑到灭菌水中，配制成浓度大于1个孢子/μL的孢子悬浮液,镜检,备用。
4.2孢子染色
使用质量浓度为100 μg/mL(溶剂为PBS)的吖定橙染色剂与孢子悬浮液以1 : 20体积比均匀混合,室温下避光染色15 min,16 000g离心1 min去上清液终止染色,灭菌去离子水洗涤1次,重悬,孢子浓度大于1个孢子/μL。避光放置备用。
SN/T 3579-2013 大豆疫霉病菌活性检测方法
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