SN/T 1674—2005.
1范围
SN/T 1674规定了锦鲤疱疹病毒(KHV)分离和聚合酶链反应(PCR)检测方法。本标准适用于锦鲤疱疹病毒病的流行病学调查、诊断、检疫和监测。
规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。
GB/T 6682—1992分析实验室用水规格和试验方法(eqv 1SO 3696,1987)
GB/T18088—2000出人境动物检疫采样
3试剂和材料
3.1 水:符合GB/T 6682—1992中一级水的规格。
3.2 KHV病毒参考株:由国家质量监督检验检疫总局指定的实验室提供。
3.3锦鲤鳍条细胞(KF):用Eagle's培养液(见第A.9章)培养于25℃。
3.4Taq酶:—20℃保存,不要反复冻融或温度剧烈变化。
3.5dNTP:含dCTP、dGTP,dATP,dTTP各10 mmoL/L。
3.6引物:浓度为40 pmoL/L。其序列如下:
KHV9/5F:5’-GAC GAC GcC GGA GAC CTT GTG-3’KHV9/5R:5'-CAC AAG TTC AGT CTG TTC CTC AA-3’
3.7异丙醇;分析纯,使用前预冷到一20℃。
3.8矿物油:要求无 DNA酶和RNA酶,用于无热盖的PCR扩增仪。
SN/T 1674—2005 锦鲤疱疹病毒分离和聚合酶链反应试验操作规程
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