SN/T 2635—2010.
1范围
SN/T 2635规定了水稻瘤矮病毒检疫鉴定的程序和方法。本标准适用于水稻上水稻瘤矮病毒的检测。
2原理
水稻瘤矮病毒学名:rice gall dwarf sirus,编写。
RGDV,水稻瘤修病毒的分子生物学特性是本标准
制定的主要依据;该病毒的分类地位、寄主范围,护香症状、分布业区.传播途径、粒体形态,病毒基因组等参见附录A。
3仪器设备﹑用具及试剂
3.1仪器设备
高速冷冻离心机﹑微量天平(17/1 000 g),PCR仪、实时灾光PCR仪,电泳仪,水平电泳槽、凝胶成像分析系统,pH计,微波炉、磁力搅拌器、恒温水浴锅,高压灭菌卧超净工作台等。
3.2用具
各种量程的可调移液器(1doo al. 200 uL 100 pL, 2o0 p、 ,10 nl2 pL),PCR反应管、无RNase 离心管(1.5 mL)、研钵等。
3.3 试剂
3.3.1TrizoL裂解液。
3.3.25×TBE缓冲液
Tris碱54.0 g硼酸27.5 g
0.5 mol/ L EDTA(pH8.0)20 ml补充蒸馏水至1 L.
3.3.36×加样缓冲液
0.25%溴酚蓝
40%(质量浓度)蔗糖水溶液。
3.3.4 三氯甲烷。
3.3.5异丙醇。
3.3.675%乙醇。
5结果判定及记录
5.1结果判定
当RT-PCR,实时荧光RT-PCR两种检测方法的检测结果均呈阳性时,则判定为检出RGDV。
当RT-PCR检测结果呈阳性,测定的序列为RGDV序列(与已报道的RGDV序列同源性达90%以上),则判定为检出RGDV。
5.2结果记录
记录好各项实验数据,包括样品来源,种类,时间实验的时间、点、方法和结果等,并要有经手人和实验人员的签字。分子生物学检测结果保留p永照片,序列)定结果保留测序报告图。
6样品的保存
经检测结果判定为阳性的样品应妥善保存在一20 C--80 ℃超低温冰箱中,并作好登记和标记工作,以备复核用。
SN/T 2635—2010 水稻瘤矮病毒的检疫鉴定方法
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